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BioVendor miRNA定量检测试剂盒(PCR法)

发布者:买球网科技    发布时间:2021-07-06     
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miRNA是许多人类病理学中有潜力的诊断和预后生物标志物如何准确对miRNA进行定量呢?前期买球网介绍了免疫法定量miRNA的试剂盒当日介绍常规基于PCR法的miRNA定量的试剂盒——双尾RT-qPCR.


传统microRNA PCR检测方法的痛点:用传统的PCR法检测microRNA的挑战于于两个常规PCR引物的总长度几乎是microRNA长度的两倍因此不适合于做miRNA的引物.以前的技术通过使用发夹引物延伸microRNA添加poly A尾巴或通过连接添加片段来解决这个问题但是这会降低检测的灵敏度和特异性.此外这些方法无法检测于3'末端修饰的microRNA因为它会干扰延伸过程.

 

市面上常见的miRNA定量检测试剂盒原理

市面上常见的miRNA定量检测试剂盒原理

 

BioVendor专利产品——双尾RT-qPCR

买球网专利的双尾RT-qPCR技术具有独特的RT引物机制与其他方法相比可提供出色的灵敏度和特异性.双尾RT-qPCR技术已被开发用于总的miRNA和piRNA的定量.

 

双尾RT-qPCR原理:与使用单个结合探针不同双尾PCR使用两个半探针它们分别结合到不同的microRNA片段上这些片段通过折叠的系链连接.虽然每个半探针本身都很短, 无法结合到microRNA上但当两个半探针互补时它们会协同结合这种结合的特异性是非常高的因为于短半探针中错配的影响非常大.然后可以使用两个特定序列引物对形成的cDNA进行PCR扩增用SYBR进行检测.

 

双尾RT-qPCR原理

 

双尾RT-qPCR优势:

  • 高灵敏度(最多少于10个分子)

  • 高特异性

  • 适合于多种样本(血浆/血清血液组织等)中的miRNA检测和定量

  • 通过折叠的系链连接的两个半探针(结合不同的microRNA片段)

  • 动态范围广(高达9 log)

  • 于进行单重qPCR之前可进行双管多重RT-PCR

  • 提供定制化服务

 

1.高灵敏度及特异性:

  • 5?互补片段显著提高分析的灵敏度:


 双尾RT-qPCR优势

  • 5? 互补片段显著提高检测的特异性:


 双尾RT-qPCR优势


5′-hemiprobe的特异性及灵敏度验证:为了测试5′-hemiprobe对特异性的贡献买球网比较了两种双尾RT引物区分Let-7 miRNA家族的两个成员:Let-7a和Let-7f的能力它们仅有位于miRNA序列中心的单个核苷酸的差异.RT 1引物的5'-hemiprobe设计成与let-7a的5'-末端的前10个核苷酸结合 而RT 2引物的5'-hemiprobe结合于let-7a的8个核苷酸上通过这种设计区分let-7a和let-7f的核苷酸只是由RT 2引物的5′-hemiprobe检测的而不是由RT 1引物检测的.RT 2引物的5′-hemiprobe也很短(8个核苷酸)因为买球网认为探针序列较短时错配的影响会更加明显.其余的RT 1和RT 2引物序列以8用的PCR引物是完全相同的.使用RT 2引物时完全匹配和错配的模板之间的ΔCq(ΔCq= 11.07)显著大于使用RT 1引物(ΔCq = 4.66)不带有5′-hemiprobe的不同碱基重叠的RT 2引物而不是不带有RT 1引物的RT 2引物.这证明了5'-半探针对系统特异性的重大贡献.值得注意的是两种双尾RT引物完全互补的let-7a microRNA的Cq值相等表明即使5′-hemiprobe的长度有两个碱基的不同检测灵敏度仍然相同.

 

2.适用样本类型丰富:

5′-hemiprobe.png

新鲜组织冷冻/福尔马林固定组织的

血浆/ 血清/ 尿液/ 脑脊液/ 生物液体新鲜组织冷冻/福尔马林固定组织的

细胞外泌体

细胞外泌体

 

3.miRNA定量的试剂盒检测流程简便:

5′-hemiprobe-3.jpg

相关miRNA定量的试剂盒产品推荐:

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