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Jackson SRM应用荧光标记2抗

发布者:买球网科技    发布时间:2021-12-31     
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       买球网科技作为Jackson中方区域总代理将为您提供Jackson的特色优质产品主要包括各种纯化的2抗 .标记的2抗(AMCA . Cy2 .FITC .Cy3 .TRITC .RRX .TR .Cy5 .长臂生物素 .辣根酶和碱磷酶标记) .胶体金试剂等.当日主要为您介绍SRM应用荧光标记2抗看下文介绍:

      如今科学家们已经研发了多种超分辨率技术远远超出了衍射极限能够观察到分子尺度的细节.SRM技术可以将细胞结构解析为亚细胞水平从而获取有关细胞组分的3D结构的信息并可以观察到单分子共定位.下面买球网来简要概述了时下几种最流行的SRM技术的原理:

       1.受激发射耗竭(STED)显微镜

      STED对于有经验的荧光显微镜使用者来说相对简单该方法和普通共聚焦显微镜(Confocal)的原理相同.普通Confocal使用单光源而STED使用双光源.其中1个光源发射能激发荧光团——荧光标签(研究者们以此来定位和观察蛋白)的光另1个光源发出不同波长的光用于抑制荧光.这束光是环形的并且与第1束光有所重叠因此只有环形中间区域的分子会继续发出荧光.

获得STED超分辨率图片并没有那么复杂用户需要仔细调整参数才能得到漂亮的结果否则所得图片和普通confocal没有差别.


STED.jpg


      使用传统和RESCue受激发射减损显微镜(STED)得到的细胞4ど虾丝赘春咸宓耐计.

       STED的原理:

      显微镜透镜对光的衍射会导致来自单个点的光出现于较大的区域这称为点扩散函数(PSF)(见图1)由于PSF的存于使得常规显微镜无法达到超分辨.


PSF.png

       图1:于普通光学显微镜中成像是通过将来自点光源的光线会聚到像平面上的单个点来实现的.超出光衍射的限制防止了射线的好的会聚从而导致物体的图像:.显微镜的分辨率萚鲇诘憷┥⒑数(PSF)的大.或对象于某个点的3维强度分布.于STED中应用环形炸弹耗尽型激光器其零点与激发激光焦点的好的值重叠.STED激光器引起荧光的"饱和耗尽"从而"抑制了来自零点附近区域的荧光导致有效PSF的尺寸减小".

      而受激发射耗竭(STED)显微镜通过限制样品的荧光区域(PSF)产生超分辨率图像.STED显微镜使用两个重叠的激光第1个按照常规显微镜激发荧光团(图2A).第2个激光器称为耗尽激光器(STED激光器)它激发"甜甜圈"形状的激光其中心的零强度点非常.?30 nm)(未激发).除了于甜甜圈的中心处之外第2激光起到了"关闭"第1激光所产生的外圈荧光从而将样本激发的荧光分子范围缩小到中心圆点处这有效地降低了PSF以产生非常小的单分子荧光聚焦区域从而获得高分辨率图像(图2D).


PSF-1.jpg

       图2:

      1.单个小于250 nm的蛋白质无法通过标准共聚焦成像解析从而导致图像:

      2.STED耗尽激光器产生了淬灭外围荧光的"甜甜圈"

      3.饱和耗尽于功能上降低了激励PSF

      4.随之可以解析单个蛋白质

       适用于STED的荧光团偶联抗体:

      为了获得超分辨率染料必须具有STED激光波长的高发射截面并有效地实现高饱和度.这种强烈的照明确保了所有被STED激光"关闭"的分子都受受激发射的支配.合适的染料应具有低的光漂白性具有高的量子产率和对比度并于目标附近具有足够的标记密度.

      Jackson提供荧光染料标记的2抗下列染料标记的2抗已被验证于STED中成功使用:


染料货号
AlexaFluor®488115-545-003
FITC715-095-150
AlexaFluor®594715-585-151
AlexaFluor®647 

     

        2. 随机光学重建显微镜(STORM)

      最有名的"基于探针"的技术是Betzig等人研发的光激活定位显微技术(photoactivated localization microscopy, PALM)和哈佛大学庄小威实验室发明的随机光学重建显微技术(stochastic optical reconstruction microscopy, STORM).最初所有的荧光标签都是暗的.然后使用激光脉冲来激活1小部分荧光标签随后使用另1束光来关闭这些荧光标签.不断重复这个过程生成1系列部分荧光图最后重建成整个视野的荧光图.以产生分辨率优于常规方法收集的图像.


STORM.jpg


      使用超分辨率随机光学重建显微镜(stochastic optical reconstruction microscopySTORM)科学家首次观察到了神经块轴突的细胞骨架.

      Jackson提供适用于dSTORM应用的标记2抗简而言之较低强度的激发光激发样品随机激活少量染料分子.单个发荧光的染料分子足够分散因此可以计算其点扩散函数的中心从而推断出染料的确切位置.然后使用第2激光关闭所有分子并重复该过程.然后通过重叠每种染料的所有映射点扩展函数以数学方式生成高分辨率图像.

       用于单分子定位实验的荧光团偶联抗体

 用于单分子定位的最佳染料通常非常亮并产生足够的光子以可靠地产生紧密的高斯分布.Jackson ImmunoResearch提供了多种广谱范围内的可靠染料例如AlexaFluor®488AlexaFluor®647和Cy™5可用于这些类型的实验.

       建议用于超分辨率显微镜的荧光染料偶联物:


STED激发波长(nm)发射波长(nm)
Alexa Fluor® 488493519
荧光素 / FITC492520
Alexa Fluor® 594591614
Alexa Fluor® 647651667

 

STORM激发波长(nm)发射波长(nm)
Alexa Fluor® 488493519
Alexa Fluor® 647651667
Cy™5650670

      每种SRM技术都有各自的探针选择要求Jackson ImmunoResearch提供多种已知于SRM应用中表现良好的荧光标记2抗.应该注意的是SRM领域变化迅速因此建议从专业技术文献中寻求信息以帮助选择合适的荧光团.

      更多相关Jackson ImmmoResecarch品牌的SRM应用荧光标记2抗产品详情欢迎点击查看:超分辨率显微镜分析荧光抗体该怎么.

      作为Jackson ImmmoResecarch于中方的区域代理买球网科技有限公司将为中方客户提供最全面的ackson ImmmoResecarch品牌的SRM应用荧光标记2抗产品以及订制服务欢迎随时联系买球网.


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