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通过LC3-Ⅱ水平看细胞自噬的发生

发布者:买球网科技    发布时间:2021-07-20     
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自噬(autophagy)是于真核细胞中过量或异常的细胞器被双膜泡隔离并交付给溶酶体/液泡后被降解回收利用细胞性物质及清除受损细胞器或有害的蛋白质的过程.自噬的过程包括隔离膜(isolation membrane)或自噬前体(pre-autophagosome)的形成及延伸 .自噬体(autophagosome)的形成 .自噬体和溶酶体融合后形成自噬溶酶体(autolysosome)最终胞内物质降解产生的降解产物如氨基酸 .脂肪酸等可被细胞再利用.

 

自噬.jpg

 

自噬于维持细胞内稳态发挥重要的生物学作用:①应对外源性刺激自身降解重新获得生长所需营养物质.②细胞自我更新降解胞内衰老蛋白和细胞器后重新合成蛋白和细胞器.③防御性清除胞内受损大分子物质维持细胞正常功能.

 

既然自噬对维持细胞稳态如此重要那么自噬检测怎么做呢?说到这里就不得不提到公认的自噬标志物——微管相关蛋白1的轻链3(microtubule-associated-proteinlight-chain-3LC3).正常情况下LC3以未脂化的可溶性形式存于于胞浆中被称为LC3-Ⅰ其分子量为18kDa.自噬形成时LC3-Ⅰ酶解转化成为膜型LC3又被称为LC3-Ⅱ其分子量为16kDa.LC3Ⅱ于聚丙烯酰胺凝胶上表现出的迁移率高于LC3-ⅠLC3-Ⅱ与噬小体/自噬溶酶体的数量呈正相关所以LC3-Ⅱ被广泛地应用于定量细胞自噬的活性.

 

作为专业的生命科学医药原料供应商Cell Biolabs中方区好的代理买球网科技为您推荐:细胞自噬分析检测试剂盒!

货号CBA-5115
名称Autophagy Immunoblot Kit (LC3-II Detection)
自噬免疫印迹试剂盒(LC3-II 检测)
检测方法WB
结果图

自噬免疫印迹试剂盒(LC3-II 检测).png


泳道 2:HeLa 对照裂解液(未去除胞质 LC3)
泳道 3:氯喹处理的HeLa 裂解液(未去除胞质 LC3)
泳道 4:HeLa 对照裂解物(去除胞质 LC3)
泳道 5:氯喹处理的HeLa 裂解液(去除胞质 LC3)
 
货号CBA-5116
名称Autophagy ELISA Kit (LC3-II Quantitation)
自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量)
检测方法ELISA(检测细胞裂解液)
结果图

自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量).png

 
货号CBA-5117
名称Cellular Autophagy ELISA Kit (LC3-II Quantitation)
细胞自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量)
检测方法基于细胞的ELISA
结果图

细胞自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量).png

 

LC3-GFP.png

 

LC3与绿色荧光蛋白(GFP)结合成LC3-GFP显示出与LC3相同的过程并且可通过监控液泡输送和GFP-LC3后续的分解而示踪自噬通量.当自噬通量正常存于于自噬体内部的GFP-LC3于自噬体膜融解且暴露于液泡水解酶的内容物被裂解.GFP-LC3的蛋白水解可释放出1个完整的GFP部分因其对降解有相对抗性可作为自噬产物累积于液泡.自由的GFP水平增加可被检测且可通过Western印迹分析进行定量并与自噬率相关.GFP是酸敏感型GFP蛋白由于自噬溶酶体内部的酸性环境可以导致pH下降 .GFP淬灭因此GFP的强弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度.除了以上LC3-II检测试剂盒Cell Biolabs当然还可以提供GFP-LC3表达质粒(cat#CBA-401):

 

GFP-LC3表达质粒.png


左侧是pCMV-GFP对照质粒;右侧是pCMV-GFP-LC3表达质粒


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