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分子生物学常用溶液配制

发布者:买球网科技    发布时间:2021-05-24     
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1 .分子生物学常用贮存液的配制


1.30%丙烯酰胺溶液

[配制方法]将 29g 丙烯酰胺和 1g NN'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml的水中.加热至 37℃溶解之补加水至终体积为 100ml.用滤器(0.45μm 孔径)过滤除菌查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0置棕色瓶中保存于室温.


[注意]丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收其作用具累积性.称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具.可认为聚丙烯酰胺无毒但也应谨慎操作因为它还可能会含有少量未聚合材料.1些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通:有1些金属离子于丙烯酰胺贮存液中加入大约 0.2 体积的单床混合树脂(MB-1Mallinckrodt)搅拌过夜然后用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之.于贮存期间丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯:退丙烯酸.


 2.40%丙烯酰胺

[配制方法]把380g 丙烯酰胺(DNA 测序级)和20g NN'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 600ml 的蒸馏水中.继续按上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法处理但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为 1L.


[注意]见上述配制 30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列测定 .


3.放线菌素D溶液

[配制方法]把 20mg 放线菌素 D 溶解于 4ml 100%乙醇中1:10 稀释贮存液用 100%乙醇作空白对照读取 OD440 值.放线菌素 D(分子量为 1255)纯品于水溶液中的摩尔消化系数为 21900故而 1mg/ml 的放线菌素 D 溶液于 440nm 处的吸光值为 0.182放线菌素 D 的贮存液应放于包有箔片的试管中保存于-20℃.


[注意]放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并于通风橱内操作,而不能于开放于实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤.药厂提供的作治疗用途的放线菌素 D 制品:有糖或盐等添加剂.只要通过测量贮存液于 440nm 波长处的光吸收确定放线菌素 D 的浓度这类制品便可用于抑制自身引导作用.


4.0.1mol/L腺苷3磷酸(ATP)溶液

[配制方法]于 0.8ml 水中溶解 60mg ATP,用 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0用蒸馏水定容 1ml分装成衊荼4嬗-70℃


5.10mol/L乙酸酰溶液

[配制方法]把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中加水定容至 1L 后过滤除菌.


6.10%过硫酸铵溶液

[配制方法]把 1g 过硫酸铵溶解于终量为 10ml 的水溶液中该溶液可于 4℃保存数周.


7.BCIP溶液

[配制方法]把 0.5g 的 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸2钠盐(BCIP)溶解于 10ml 100%的2甲基甲酰胺中保存于 4℃


8.2×BES缓冲盐溶液

[配制方法]用总体积 90ml 的蒸馏水溶解 1.07g 盐溶液 BES[NN-双(2-羟1)-2-氨基1撬醈 .1.6g NaCl 和 0.027g Na2HPO4室温下用 HCl 调节该溶液的pH 值至 6.96 .然后加入蒸馏水定容至 100ml用 0.22μm 滤器过滤除菌分装成衊荼4嬗-20℃.


9.1mol/LCaCl2溶液

[配制方法]于200ml 蒸馏水中溶解 54g CaCl2·6H2O用0.22μm 滤器过滤除菌分装成 10ml 衊葜存于-20℃.


[注意]制备感受态细胞时取出1衊萁舛巢⒂谜袅笏稀释至 100ml用 Nalgene滤器(0.45μm 孔径)过滤除菌然后骤冷至 0℃.


10.2.5mol/LCaCl222溶液

[配制方法]于 20ml 蒸馏水中溶解 13.5g CaCl2·6H2O用 0.22μm 滤器过滤除菌 分装成 1ml 衊葜存于-20℃.


11.1mol/L2硫苏糖醇(DTT)溶液

[配制方法]用 20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液(pH5.2)溶解 3.09g DTT过滤除菌后分装成 1ml 衊葜存于-20℃.


[注意]DTT 或含有 DTT 的溶液不能进行高压处理.


12.脱氧核苷3磷酸(dNTP)溶液


[配制方法]把每1种 dNTP 溶解于水至浓度各为 100mmol/L 左右用微量移液器吸取0.05mol/l Tris 碱分别调节每1dNTP溶液的pH 值 7 .0(用 pH 试纸检测 )把中和后的每种 dNTP 溶液各取1份作适当稀释于下表中给出的波长下读取光密度计算出每种 dNTP 的实际浓度然后用水稀释成终浓度为 50mmol/L 的dNTP分装成衊葜存于-70℃.比色杯光径为 1cm 时,吸光度=εM


13.0.5mol/lEDTA(pH8.0)溶液

[配制方法]于800ml 水中加入 186.1g 2水乙2胺4乙酸2钠(EDTA-Na·2H2O)于磁力搅拌器上剧烈搅拌用 NaOH 调节溶液的 pH 值至 8.0(约需 20g NaOH颗粒)然后定容至 1L分装后高压灭菌备用.


[注意]EDTA 2钠盐需加入 NaOH 将溶液的 pH 值调至接近 8.0,才能完全溶解.


14.溴化乙锭(10mg/ml溶液)


[配制方法]于 100ml 水中加入 1g 溴化乙锭磁力搅拌数小时以确保其完全溶解然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中保存于室温.


[注意]小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套称量染料时要戴面罩.


15.2×HEPES缓冲盐溶液

[配制方法]用总量为 90ml 的蒸馏水溶解 1.6g NaCl .0.074g KCl .0.027gNa2PO4·2H2O .0.2g 葡聚糖和 1gHEPES用 0.5mol/l NaOH 调节 pH 值至 7.05再用蒸馏水定容至 100ml.用 0.22μm 滤器过滤除菌分装成 5ml 衊葜存于-20℃.


16.IPTG溶液

[配制方法]IPTG 为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量为 238.3)于 8ml 蒸馏水中溶解 2g IPTG 后用蒸馏水定容至 10ml用 0.22μm 滤器过滤除菌分装成 1ml 衊葜存于-20℃.


17.1mol/L乙酸镁溶液

[配制方法]于 800ml 水中溶解 214.46g 4水乙酸镁用水定容至 1L 过滤除菌.


18.1mol/LMgCl2溶液

[配制方法]于 800ml 水中溶解 203.4g MgCl2·6H2O用水定容至 1L分装成衊莶⒏哐姑鹁备用.


[注意]MgCl2 极易潮解应选购小瓶(如 100g)试剂启用新瓶后勿长期存放 .


19.β-巯基乙醇(BME)溶液

[配制方法]1般得到的是 14.4mol/L 溶液应装于棕色瓶中保存于 4℃.

[注意]BME 或含有 BME 的溶液不能高压处理.


20.NBT溶液

[配制方法]把 0.5g 氯化氮蓝4唑溶解于 10ml 70%的2甲基甲酰胺中,保存于4℃.


21.酚/氯仿溶液

[配制方法]把酚和氯仿等体积混合后用 0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆盖等体积的 0.01mol/l Tris·HCl(pH=7.6)液层,保存于 4℃.

[注意]酚腐蚀性很强并可引起严重灼伤操作时应戴手套及防护镜穿防护服.所有操作均应于化学通风橱中进行.与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗并用肥皂和水洗涤忌用乙醇.


22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

[配制方法]用异丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml(10mmol/L)分装成衊葜存于-20℃.如有必要可配成浓度高达 17.4mg/ml 的贮存液(100mmol/L).

[注意]PMSF 严重损害呼吸道粘膜 .眼睛及皮肤吸入 .吞进或通过皮肤吸收后有致命危险.1旦眼睛或皮肤接触了 PMSF应立即用大量水冲洗之.凡被PMSF 污染的衣物应予丢弃.

PMSF 于水溶液中不稳定.应于使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中.PMSF 于水溶液中的活性丧失速率随 pH 值的升高而加快且 25℃的失活速率高于 4℃.pH 值为 8.0 时,20μmmol/l PMSF 水溶液的半寿期大约为 85min这表明将 PMSF 溶液调节为碱性(pH>8.6)并于室温放置数小时后,可安全地予以丢弃.


23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液

[配制方法]于800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl .0.2g KCl .1.44g Na2HPO4 和 0.24gKH2PO4,用 HCl 调节溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L于 15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌 20min.保存于室温.


24.1mol/L乙酸钾(pH=7.5)溶液

[配制方法]将 9.82g 乙酸钾溶解于 90ml 纯水中用 2mol/L 乙酸调节 pH 值至7.5 后加入纯水定容到 1L保存于-20℃.


25.乙酸钾溶液(用于碱裂解)

[配制方法]于 60ml 5mol/L 乙酸钾溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水即成钾浓度为 3mol/L 而乙酸根浓度为 5mol/L 的溶液.


26.3mol/L乙酸钠(pH5.2和pH7.0)溶液

[配制方法]于 80ml 水中溶解 408.1g 3水乙酸钠用冰乙酸调节 pH 值至 5.2或用稀乙酸调节 pH 值至 7.0加水定容到 1L分装后高压灭菌.


27.5mol/LNaCl溶液

[配制方法]于 800ml 水中溶解 292.2g NaCl 加水定容至 1L分装后高压灭菌.


28.10%102烷基硫酸钠(SDS)溶液

[配制方法]于 900ml 水中溶解 100g 电泳级 SDS加热至 68℃助溶加入几滴浓盐酸调节溶液的 pH 值至 7.2加水定容至 1L分装备用.

[注意]SDS 的微细晶粒易扩散因此称量时要戴面罩称量完毕后要清除残留于称量工作区和天平上的 SDS10%SDS 溶液无须灭菌.


29.20×SSC溶液

[配制方法]于800ml 水中溶解 175.3g NaCl 和 88.2g 柠檬酸钠加入数滴 10mol/lNaOH 溶液调节 pH 值至 7.0加水定容至 1L分装后高压灭菌.


30.20×SSPE溶液

[配制方法]于 800ml 水中溶解 17.5g NaCl .27.6g NaH2PO4·H2O 和 7.4g EDTA,用 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.4(约需 6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至 1L,分装后高压灭菌.


31.100%3氯乙酸溶液

[配制方法]于装有 500g TCA 的瓶中加入 227ml 水形成的溶液含有 100%(M/V)TCA.


32.1mol/LTris溶液

[配制方法]于 800ml 水中溶解 121.91g Tris 碱,加入浓 HCl 调节 pH 值至所需值 .pHHCl7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml应使溶液冷至室温后方可最后调定 pH 值加水定容至 1L分装后高压灭菌.


[注意]如 1mol/L 溶液呈现黄色应予丢弃并置备质量更好的 Tris.尽管多种类型的电极均不能准确测量 Tris 溶液的 pH 值但仍可向大多数厂商购得合适的电极.Tris 溶液的 pH 值因温度而异温度每升高 1℃pH 值大约降低 0.03 个单位.例如:0.05mol/L 的溶液于 5℃ .25℃ .和 37℃时的 pH 值分别为 9.5 .8.9 和 8.6.


33.Tris缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/lTris)

[配制方法]于800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl .0.2g KCl 和 3g Tris 碱加入 0.015g酚并用 HCl 调至 pH 值至 7.4用蒸馏水定容至 1L分装后于151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌 20min于室温保存.


34.X-gal溶液

[配制方法]X-gal 为 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D 半乳糖苷.用2甲基甲酰胺溶解 X-gal 配制成的20mg/ml 的贮存液.保存于1玻璃管或聚丙烯管中装有 X-gal 溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏并应贮存于-20℃.X-gal 溶液无须过滤除菌.


2 .常用抗生素溶液

a:以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理.所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存.

b:镁离子是4环素的拮抗剂4环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如LB 培养基).


3 .常用的电泳缓冲液


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买球网据今日俄罗斯(RT)4月28日报道,这名教师名叫鲁本·达里奥·帕拉·苏莱塔,是哥伦比亚帕尔米拉市圣文森特教育学院(SanVicenteEducationInstitution)的一名教师。一是建造并运营近地空间站,突破、掌握和发展大型复杂航天器的在轨组装与建造、长期安全可靠飞行、运营管理和维护技术,带动相关领域和行业的科技进步。
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